科技通报

蒙药额尔顿乌日勒对兔视网膜缺血再灌注损伤的血液流变学

点击数:10    日期:2016-08-23 08:43:43

目的:观察兔视网膜缺血再灌注损伤血液流变学变化及额尔顿乌日勒的保护作用。方法:将95只日本大耳白兔随机分为正常组、模型组
  

  【摘 要】 目的:观察兔视网膜缺血再灌注损伤血液流变学变化及额尔顿乌日勒的保护作用。方法:将95只日本大耳白兔随机分为正常组、模型组、额尔顿·乌日勒(又名珍宝丸)组和原花青素组(PC组),采用升高兔眼压到50mmHg持续2h的方法制作视网膜缺血再灌注模型。除正常组外,每组分别在缺血再灌注1、6、12、24、48、72h后检测视网膜组织中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性及血液流变学指标。结果:除血浆黏度外,模型组与正常组比较,血液流变学差异有统计学意义(P<0.05);珍宝丸组及PC组与模型组比较,血液流变学差异有统计学意义(P<0.05),珍宝丸组与PC组比较差异有统计学意义(P<0.05)。SOD:模型组的24h、48h、72h与正常组比较视网膜组织中SOD活力均明显下降,珍宝丸组及PC组的24 h、48h、72h视网膜组织中SOD活力均相应的有所提高,且明显高于同时间点模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。组内24 h、48h、72h与1h、6h、12h比较,SOD活力均有降低,差异有统计学意义(P<0.05)。MDA:模型组24 h、48h、72h与1h、6h、12h比较,珍宝丸组及PC组与模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:额尔顿乌日勒可改善视网膜的血流,防治视网膜缺血再灌注损伤。
【关键词】 额尔顿乌日勒;视网膜;缺血再灌注;血液流变学
本文应用《中国民族民间医药
1 材料和方法
1.1 实验动物及分组 健康成年无眼疾雄性日本大耳白兔95只,体重2.5~3.0kg,室温环境饲养。随机分为正常组(5只)、模型组(30只)、珍宝丸组(30只)、PC组(30只)。
1.2 主要仪器和试剂721分光光度计(上海第三分析仪器厂) ,JN-A型精密扭力天平(上海第二天平仪器厂)。丙二醛测试盒,超氧化物歧化酶测试盒(南建成生物工程研究所)。
1.3 给药方法 于造模前7天按体重下胃管给药,珍宝丸组灌入珍宝丸0.15g/kg,PC组灌入原花青素300mg/kg,1次/d。正常组及模型组给予等量生理盐水。
1.4 动物模型制备 采用前方灌注高眼压致缺血的方法:将兔子称体质量,2%戊巴比妥钠以剂量1 ml/kg,耳缘静脉注射麻醉后,随机选取每只兔的1只眼造模,复方托吡卡胺散瞳,滴盐酸奥布卡因滴眼液眼表面麻醉,将连有生理盐水灌注的7号头皮针沿颞侧角巩膜缘斜面向上刺入兔眼前房,为了避免损伤晶状体和虹膜,用胶布固定头皮针于兔眼同侧耳缘处。缓慢升高输液瓶至兔眼实验眼垂直距离为90cm,此高度可在眼内形成50mmHg的眼压,使眼内压超过体循环收缩压,从而阻断视网膜血流,达到缺血的目的。当球结膜及虹膜迅速变白时用直接检眼镜观察视网膜苍白,视网膜中央动脉的供血完全阻断。实验过程中间断点红霉素眼膏以保持角膜湿润并预防感染。持续2h后,逐渐降低输液瓶高度至兔眼球水平使眼内压缓慢降低,以恢复视网膜血供,此时关闭输液器并拔出前房灌注针头,虹膜及球结膜颜色迅速恢复正常,眼底视网膜呈橘红色,说明阻断的血管重新开放,形成再灌注,即为IR模型建立成功。术毕结膜囊涂红霉素眼膏,待清醒后回笼。
1.5 取材 造模后通血再灌注1h时间点从耳缘静脉取血5ml进行血流变检查,分别再灌注1、6、12、24、48、72h后处死兔,立即摘取右眼剥离视网膜,取上清液做MDA、SOD吸光度值的测定。
1.6 观察内容
1.6.1 从各小组动物耳缘静脉抽取全血5ml,置于肝素钠抗凝管,摇匀后置于北京塞科希德自动血流变测试仪上立即检测全血高切黏度、全血中切黏度、全血低切黏度、血浆黏度等指标,其指标由机载程序及特定公式导出;并将所检测指标的结果打印成表。
1.6.2 分别于再灌注1h、6h、12h、24h、48h、72h后立即空气栓塞处死动物,迅速摘除眼球,在冰环境中环角巩膜缘切开,弃去角膜和晶状体等,外翻眼球,解剖显微镜下剥离视网膜,以分析天平称视网膜湿重,再用双蒸水配成2%的湿重,匀浆。将匀浆液倒入试管中, 3000r/min离心15min,取出上清液,测定其MDA 含量和SOD的活性值。具体操作方法依照MDA和SOD 试剂盒说明书步骤进行。
1.7 统计学处理 采用SSPS 13.0进行统计分析,计量资料用(x±s)表示,组间比较用t检验。以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 实验动物情况 实验过程中3只兔因腹泻死亡,2只兔因胃肠胀气死亡,2只兔不明原因死亡,尸检发现肺脏充血,纤维化严重,考虑肺炎,整个实验过程中共死亡7只兔,与实验药物作用无关。
2.2 血液流变学的检测结果 除血浆黏度外,模型组与正常组比较,血液流变学差异有统计学意义(P<0.05);珍宝丸组及PC组与模型组比较,血液流变学差异有统计学意义(P<0.05),珍宝丸组与PC组比较差异有统计学意义(P<0.05),见表1。
2.3 视网膜组织中MDA含量及SOD活性的检测结果 模型组的24h、48h、72h与正常组比较视网膜组织中SOD活力均明显下降,珍宝丸组及PC组的24 h、48h、72h视网膜组织中SOD活力均相应的有所提高,且明显高于同时间点模型组,差异有统计学意义(P<0.05),见表2。MDA含量明显低于模型组(P<0.05),见表3。组间内24h、48h、72h 与1h、6h、12h比较,SOD活力均有降低,差异有统计学意义(P<0.05),见表2。
3 讨论
血液流变学是一门研究物体流动、变形的科学。血液流变学是生物流变学的重要分支,是研究有关血液的变形性与流动性的科学。血液流变学包括两部分内容: 宏观血液流变学和微观血液流变学。前者包括血液黏度、血浆黏度、血沉、血液及管壁应力分布; 后者包括红细胞聚集性、红细胞变形性,血小板聚集性、血小板黏附性等,故又称为细胞流变学[1]。血液为非牛顿液体,即血粘度随切变率而改变。切变率是指在层流的情况下,相邻两层血液流速的差和液层厚度的比值,血流快和血管管径小时,切变率高;血流慢和血管管径大时,切变率低。当血粘度增加时,血管扩张,维持正常的血容量。因此,如果外部压力(如眼内压)阻止了血管扩张或引起血管收缩,而自身血粘度又增高,此时血流量将减少,由此产生局部的血循环障碍,引起组织缺血、缺氧及功能代谢失调,成为组织(如视神经)变性、萎缩等一系列病理变化的基础[2]。
视网膜是代谢非常旺盛的组织,其耗氧及糖原分解能力超过全身其它任何组织,因此对缺血、缺氧极其敏感,当眼压升高超过视网膜和筛板的自身调节功能时, 即引起视网膜血液循环障碍、CRA血流改变,导致视网膜、筛板、视神经供血不足,损害视神经和视野。那么急性高眼压对眼组织的损伤, 实质是缺血-再灌注的问题[3-4]。视网膜缺血再灌注损伤后视网膜组织MDA含量明显增高,SOD活性明显降低[5]。MDA为机体内脂质过氧化的最终产物,SOD、GSH是生物体内主要的氧自由基清除剂,视网膜缺血时脂质过氧化活跃,MDA生成增多,SOD则因消耗而减少[6-7]。
[JP+2]作为地域性知名药种,在当地具有“神药”之称的传统蒙药额尔顿-乌日勒(珍宝丸)是治疗白脉病(类似于脑出血、脑血栓、神经损伤、神经根炎等脑神经系统疾病)、黑脉病(类似于高血压、高心病、冠心病等心血管疾病)和各种顽症(疑难病)的常用蒙药[8]。20世纪八、九十年代,学者们对额尔顿乌日勒进行了初步的药理学研究,认为该药具有扩张毛细血管、改善微循环、抑制血小板聚集和抗血栓作用,以及保护神经损伤等作用,据研究报道,额尔敦乌日勒还对氧自由基有很强的清除和抑制作用[9-10]。
本实验研究证实蒙药额尔顿-乌日勒改善CRA血流的功能,有效的提高兔眼视网膜组织中的SOD活性和降低MDA含量,对抗氧自由基介导的视网膜缺血再灌注损伤中具有保护作用。模型组(眼内压升高法)的切变率比正常组明显增高,血粘度增高,此时血流量减少而引起眼组织缺血、缺氧及代谢功能失调至视神经的变性、萎缩等病变损害视神经和视野。而珍宝丸组的全血切变率值与模型组比较明显降低,血粘度降低。从而为临床防止视网膜缺血再灌注损伤相关性眼病及改善视网膜中动脉血流药物的筛选提供实验性依据。
参考文献
[1]葛建忠,励刚,皇甫金变,等.创伤患者血液流变学变化的临床研究[J].现代中西医结合杂志,2007,16(7) : 914-915.
[2]麻春杰,韩雪梅,图门巴雅尔,等.加减补阳还五汤和额尔顿·乌日勒对大白兔脑缺血的保护作用及血液流变性的影响[J].中医药学刊,2002,20(2):222-237.



王编辑
中联论文网编辑
刘编辑
中联论文网编辑
赵编辑
中联论文网编辑
孙编辑
中联论文网编辑
电话
18931176030
固话
0311-80693734
投稿邮箱
ttqikan@163.com
99期刊承诺发表不成功无条件退款!
客服系统