科技通报

HPLC法测定不同产地辣椒中辣椒素和二氢辣椒素的含量

点击数:10    日期:2016-08-23 08:39:14

目的:采用反相高效液相法测定不同产地辣椒中辣椒素和二氢辣椒素的含量。方法:采用安捷伦Eclipse SB C18色谱柱(250mm×4.6mm;5μm)
  

   【摘 要】 目的:采用反相高效液相法测定不同产地辣椒中辣椒素和二氢辣椒素的含量。方法:采用安捷伦Eclipse SB C18色谱柱(250mm×4.6mm;5μm),流动相为甲醇-水(50∶50),流速为1.0ml/min,检测波长280nm,柱温25℃。结果:各产地辣椒中均含有辣椒素和二氢辣椒素,目不同产地的含量差别较大。结论:该方法准确、简便、可行,可作为辣椒药材的含量测定方法。
【关键词】 高效液相色谱法;辣椒;辣椒素;二氢辣椒素;含量测定
本文应用《中国民族民间医药
辣椒为茄科植物辣椒(Capsicum annuum L.)或其栽培变种的干燥成熟果实,夏秋二季果皮变红时采收,除去枝梗,晒干。辣椒现收载于2015年版《中国药典》一部中,其味辛热,归心脾经,具有温中散寒、开胃消食的功效,用于寒滞腹痛、呕吐、泻痢、冻疮[1]370 ,是著名中成药十滴水[1]449、关节止痛膏[1]869-870、天和追风膏[2]等的组方药材之一。辣椒在中国南北方具有大量栽培,也作为蔬菜或调味品。辣椒中已发现有生物碱、萜类、不饱和脂肪酸等类型的化合物,辣椒素和二氢辣椒素是辣椒中的主要活性成分,也是辣椒中辣味的来源,其含量的高低直接影响到辣椒及其制品的辣度和疗效,可作为评价辣椒质量的重要指标成分[3]。研究以辣椒素和二氢辣椒素为对照品,采用高效液相色谱法(HPLC)对全国收集到的26批辣椒进行测定,比较各地辣椒的质量,该方法简便快捷,结果准确。
1 仪器与材料
1.1 仪器 日本岛津高效液相色谱仪(SIL-20A自动进样器,LC-20AT 紫外检测器,DGU-20A5 柱温箱);安捷伦Eclipse SB C18(250mm×4.6mm;5μm)色谱柱;万分之一电子天平(Sartorius BP110s, 德国赛多利斯公司);FW100型粉碎机(天津泰斯特仪器有限公司);KQ-3200DV超声清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。
1.2 材料 对照品辣椒素(批号:110839-201205)和二氢辣椒素(批号:111666-201303)购自中国食品药品检定研究院;辣椒药材为红色干燥尖辣椒,去梗(购自全国各大药店,按产地计);甲醇为色谱纯,水为重蒸水,其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 对照品溶液制备 精密称取辣椒素和二氢辣椒素对照品约10mg,分别置10ml量瓶中,加入甲醇溶解并定容,制成含辣椒素和二氢辣椒素约1mg/ml的对照品贮备液,再次稀释成含辣椒素和二氢辣椒素约40μg/ml的对照品溶液,滤过,取续滤液,即得。
2.2 供试品溶液的制备 药材经粉碎机粉碎,取粗粉约0.5 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇25ml,密塞,称定重量,超声处理(功率200W,频率40kHz)30min,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
2.3 色谱条件及系统适用性考察 C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相:甲醇-水(50∶50);流速:1.0ml/min;柱温:25℃;检测波长:280nm;进样量:10μl。各峰与相邻峰的分离度均大于1.5,理论塔板数均在10000以上。色谱图见图1。
2.4 线性关系考察 取“2.1”项下对照品溶液,分别进样1、5、10、15、20μl ,注入液相色谱仪,记录色谱峰。以进样量x (μg)为横坐标,峰面积平均值Y为纵坐标,绘制标准曲线并进行回归计算,辣椒素的回归方程为Y=5825.7X+5.3,r=0.9999,结果表明辣椒素在0.0408~0.816μg范围内进样量与峰面积呈良好的线性关系;二氢辣椒素的回归方程为Y=4832.7X+12.5,r=0.9999,结果表明辣椒素在0.0398~0.796μg范围内进样量与峰面积呈良好的线性关系。
2.5 精密度试验 精密吸取上述对照品溶液10μl,连续进样6次,测定峰面积。结果辣椒素峰面积的平均值为232580,RSD=0.35%;二氢辣椒素峰面积的平均值为154236,RSD=0.56%,表明仪器精密度良好。
2.6 重复性试验 分别称取同一批样品(批号:140703)6份,按“2.2”项下方法平行制备6份试品溶液,辣椒素平均含量分别为4.01mg/g,RSD依次为1.5%;二氢辣椒素平均含量分别为4.01mg/g,RSD依次为1.5%,表明该方法重复性良好。
2.7 稳定性试验 取同一份供试品(广东饶平基地1)溶液,分别在0、2、4、8、12、24 h测定,记录色谱图,计算色谱峰的峰面积值,辣椒素峰面积平均值为233152,RSD为0.96%;二氢辣椒素峰面积平均值为154789,RSD为0.57%,表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。
2.8 加样回收率试验 取“2.6”项中已测知含量的辣椒粉末6份,每份约0.25g,精密稳定,分别置具塞锥形瓶中,精密加入辣椒素对照品储备液和二氢辣椒素对照品储备液1.0ml,按“2.2”项下的方法制备供试品溶液,在上述色谱条件下进样10μl,记录峰面积,计算回收率,结果见表1,表明方法准确度良好。
2.9 样品测定 取不同产地辣椒样品,分别按“2.2”项下方法制备供试品溶液,测定峰面积,计算各成分含量,结果见表2。
3 讨论
本试验对辣椒素溶液进行了紫外全波长扫描,其最大吸收波长在280nm左右,在该波长下测定样品,各成分峰形较好,基线稳定,干扰少,故选择280nm作为检测波长。对4种常用的流动相系统(乙腈-水、乙腈-磷酸水、甲醇-水、甲醇-磷酸水)的应用进行了考察,结果表明上述系统在等度洗脱情况下,所测的2个成分均能很好的分离,考虑到简便以及溶剂价格,最终用甲醇-水系统,被测2个成分分离度良好,峰形窄而对称,不受其他峰的干扰。
从各批次样品的色谱图来看,辣椒素和二氢辣椒素为辣椒中的主要色谱峰,二者的含量能够反映辣椒的辣度和质量。从含量看,所测26批次样品中,辣椒素的含量均明显高于二氢辣椒素,一般为1.0~2.8倍之间,并且有15批在1.0~2.0倍,因此推断,对于辣椒及其制剂,仅测定辣椒素1个成分的含量即能够起到质量控制的目的。
从所采集样品来看,各地辣椒中辣椒素含量差异较大,这可能与温度、光照、海拔以及采收时间等因素的影响有关,但由于样品采集量有限,目前还缺乏确切的数据支撑,值得进一步研究。因此,中医临床用药或中成药投料时,应注意药材的辣椒素和二氢辣椒素含量。
本实验首次对不同产地辣椒中主要活性成分辣椒素进行测定,建立的方法简便、快速、准确,对于辣椒的质量控制具有重要意义。
参考文献
[1] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典(一部)[S]. 北京:中国医药科技出版社,2015: 370,449,869-870.
[2] 卫生部药典委员会. 卫生部药品标准中药成方制剂第十八册 [S]. 1996: 47.
[3] 张晶,佟全胜,石磊岭,等. 辣椒的化学成分研究进展[J].中成药,2009, 31(12): 1906-1912.



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